克隆感受態(tài)細胞的主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大，直觀的說，使得細胞膜表面出現(xiàn)一些孔洞，便于外源基因或載體進入克隆感受態(tài)細胞。由于細胞膜的流動性，這種孔洞會被細胞自身所修復(fù)。
常用的幾種克隆感受態(tài)細胞：
1、常規(guī)克隆用的DH5α感受態(tài)；
2、慢病毒載體轉(zhuǎn)化用的stbl3；
3、建庫用的DH10B電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞；
4、用于重組蛋白表達的BL21（DE3）。
克隆感受態(tài)細胞的制作方法：
CaCl2法：
1、將快速生長的大腸桿菌置于經(jīng)低溫（0℃）預(yù)處理的低滲氯化鈣溶液中，便會造成細胞膨脹，同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結(jié)構(gòu)，促使細胞外膜與內(nèi)膜間隙中的部分核酸酶解離開來，離開所在區(qū)域，誘導(dǎo)細胞成為克隆感受態(tài)細胞；
細胞壁通透性發(fā)生變化，極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基－磷酸鈣復(fù)合物。
聯(lián)合其它的二價金屬離子（如Mn、Co）、DMSO或還原劑等物質(zhì)處理細菌，則可使轉(zhuǎn)化率提高100～1000倍。
2、此時，將該體系轉(zhuǎn)移到42℃下做短暫的熱刺激（90s），細胞膜的液晶結(jié)構(gòu)會發(fā)生劇烈擾動，并隨機出現(xiàn)許多間隙，外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復(fù)制、表達，實現(xiàn)遺傳信息的轉(zhuǎn)移，使受體細胞出現(xiàn)新的遺傳性狀。
3、將轉(zhuǎn)化后的細胞在選擇性培養(yǎng)基上培養(yǎng)，篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。
電轉(zhuǎn)法：
電擊法不需要預(yù)先誘導(dǎo)細菌的感受態(tài)，依靠短暫的電擊，促使DNA進入細菌，轉(zhuǎn)化率最高能達到109~1010轉(zhuǎn)化子/ug閉環(huán)DNA。因操作簡便，愈來愈為人們所接受。
您的位置：網(wǎng)站首頁 > 新聞資訊 > 分享幾種常用的克隆感受態(tài)細胞 
地址：上海市浦東新區(qū)宏祥北路83號
郵箱：cellsupport@bluefcell.com
傳真：
咨詢電話