白介素elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人白介素水平。用純化的人白介素抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白介素，再與HRP標(biāo)記的白介素抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。

 

　　白介素elisa試劑盒的計(jì)算：

　　以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)， 在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度。

　　試劑盒性能：

　　1、樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990以上。

　　2、批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%。

 

　　血清e(cuò)lisa試劑盒的操作流程如下：

　　1、血清總補(bǔ)體ELISA試劑盒待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。

　　2、酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。

　　3、洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，產(chǎn)品僅用于科研用洗滌液過洗一遍，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。

　　4、陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。

　　5、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　6、洗板，同(4)。

　　7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。

　　8、酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。

　　9、洗板，同(4)。

　　10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。

　　11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。

　　12、分別測450nm吸光值W1和630nm吸光值W2，最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。

　　13、數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。